服務介紹

引物是人工合成的兩個寡核苷酸序列（F和R）：F端引物與靶區(qū)域N端的DNA模板鏈互補，R端引物與靶區(qū)域C端的DNA模板鏈互補，其功能是作為核苷酸聚合作用的起始點，合成新的核酸鏈。

吉賽生物可提供：

1. circRNA/mRNA/lncRNA/miRNA，多種RNA引物設計合成；

2. circRNA成環(huán)驗證；

3. circRNA RNase R耐受驗證；

4. 基因qPCR檢測。

技術優(yōu)勢

1. 準確性：可根據(jù)基因的特殊構象位置進行引物設計；

2. 特異性：熔解曲線單峰，擴增產物與目的基因相符；

3. 專業(yè)性：由專業(yè)人員進行設計，并通過實驗嚴格驗證引物的特異性。

客戶提供

基因ID/物種/全長。

我們提供

1.定制化設計合成的引物，2OD；

2. 引物設計或驗證的實驗報告。

引物設計驗證

圖1：引物擴增曲線、溶解曲線

圖2：qPCR產物瓊脂糖凝膠電泳

圖3：qPCR產物測序結果

1. 怎么提取和逆轉錄circRNA ?

常用細胞組織等樣品提取total RNA，其中包含mRNA、lncRNA、miRNA和circRNA等所有的RNA種類，暫沒有方法直接提取circRNA。但可以對total RNA進行RNase R消化處理，以使circRNA得到富集。

對total RNA或RNase R處理的RNA進行逆轉錄，應使用隨機引物，不能使用oligo(dT)，因為circRNA沒有polyA尾。逆轉錄過程中circRNA模板是呈環(huán)形的，逆轉錄的cDNA第一鏈是線性的單鏈DNA，后續(xù)的PCR產物是線性的雙鏈DNA。

2. 如何針對外顯子環(huán)化的circRNA和內含子環(huán)化的circRNA設計引物？

外顯子環(huán)化的circRNA設計引物時需要特異性地針對環(huán)化位點處來設計引物。而內含子環(huán)化的circRNA，既可跨環(huán)化位點設計引物，也可圍繞內含子區(qū)域設計引物。

3. 做circRNA逆轉錄的時候，是否可以單獨用Oligo（dT）引物來逆轉？

不可以。circRNAs是一類不具有5' 末端帽子和3' 末端poly(A)尾巴，并以共價鍵形成環(huán)形結構的非編碼RNA分子。

4.如何確定引物的特異性？

由于circRNA的結構特殊性，引物設計出來之后，還需要做qPCR實驗來驗證引物的特異性。確定circRNA引物的特異性主要有以下3步：

a.溶解曲線：溶解曲線單峰，Tm值在正常范圍之內

b.電泳圖：電泳條帶單一，條帶大小正確

c.Sanger測序：測序結果單峰，環(huán)化位點正確