產品簡介

酶法加帽試劑盒包含牛痘病毒加帽酶（Vaccinia Capping Enzyme）、mRNA Cap 2′-O-甲基轉移酶（mRNA Cap 2′-O-Methyltransferase）及其他加帽相關組分，可在無帽結構的mRNA 5’端加入cap0或cap1結構。該結構與真核生物體內天然帽結構完全一致，可顯著降低外源 mRNA的免疫原性，增強其穩定性，并提高翻譯效率。

本試劑盒中的牛痘病毒加帽酶來源于攜帶牛痘病毒MR的重組大腸桿菌，該酶由D1R、D12L雙亞基組成，具有三種酶活性（RNA三磷酸酶活性、鳥苷酸轉移酶活性和鳥嘌呤甲基轉移酶活性），D1亞基執行RNA三磷酸酶和鳥苷轉移酶的功能，D12亞基執行鳥嘌呤甲基轉移酶的功能，能特異性將7-甲基鳥苷酸帽子結構（Cap 0） 加至RNA的5'端。mRNA Cap 2′-O-甲基轉移酶來源于攜帶有牛痘病毒mRNA Cap 2′-O-甲基轉移酶基因的重組大腸桿菌菌株。該酶可以利用S-腺苷甲硫胺酸（SAM）作為甲基供體來甲基化加帽RNA（Cap 0），從而形成Cap 1結構，即在RNA的5′末端緊挨帽結構的第一個核苷酸的2′-O位置上添加一個甲基基團。

Cap 1加帽系統催化四種酶促反應：①RNA三磷酸酶將RNA 5'-三磷酸裂解為二磷酸；②RNA 鳥苷酸轉移酶將GTP連接到RNA N1的5'-二磷酸；③鳥嘌呤7-甲基轉移酶，使用S-腺苷甲硫氨酸作為輔助因子，催化鳥嘌呤的7-氮甲基化；④mRNA Cap 2'-O-甲基轉移酶能在Cap 0-RNA 5′末端緊鄰帽結構的第一個核苷酸的2′-O上添加甲基基團。

圖1. 牛痘病毒加帽酶與mRNA Cap 2′-O-甲基轉移酶參與的mRNA酶法加帽途徑

性能優勢

本試劑盒一個反應能夠為50μg RNA完成加帽，并可放大生產毫克級別的RNA。加帽后mRNA 翻譯效率提高，可顯著改善mRNA在轉染和顯微注射實驗中的表達。

運輸與保存

≤0℃運輸；-25℃～-15℃條件下可保存一年；避免反復凍融。