服務介紹

除了常規的mRNA可翻譯蛋白外，在circRNA和lncRNA中也預測到具有翻譯的能力。吉賽生物可提供T系列載體構建和表達驗證服務，驗證“非編碼RNA”是否具備翻譯功能，助力機制研究。

circRNA翻譯驗證載體示意圖

T1： circRNA-OE（circRNA過表達載體）

使用吉賽生物專利技術的第五代circRNA過表達載體進行構建，利用載體攜帶的側翼成環框架（IR）使插入的circRNA序列準確剪切成環表達。包含細胞轉染和qRT-PCR檢測，保證插入的circRNA序列準確剪切成環過表達。

T2：circRNA-3xFlag（含3xFlag標簽的circRNA過表達載體）

在circRNA-OE載體的基礎上，于預測ORF的終止密碼子前添加3xFlag標簽序列，利用載體攜帶的側翼成環框架（IR）使插入的含3xFlag標簽的circRNA序列準確剪切成環表達。包含細胞轉染和qRT-PCR檢測，保證插入的circRNA序列準確剪切成環過表達。

T3：circRNA-3xFlag-△ATG（含3xFlag標簽并突變ATG的circRNA過表達載體）

在circRNA-3xFlag載體的基礎上，突變預測ORF的起始密碼子ATG，利用載體攜帶的側翼成環框架（IR）使插入的含3xFlag標簽的circRNA序列準確剪切成環表達。

T4：circRNA-3xFlag-NC（含3xFlag標簽并刪除下游IR的載體，即不能成環的陰性對照）

在circRNA-3xFlag載體的基礎上，刪除載體下游的成環框架（IR），使能轉錄生成與circRNA-3xFlag相同的RNA序列但不剪切成環。該載體可作為陰性對照使用。

T5：circRNA-3xFlag-**aa（預測ORF的線性表達載體，即**aa的陽性對照）

使用與吉賽生物專利技術的第五代circRNA過表達載體相同骨架（不含成環框架）的載體進行構建，插入預測的ORF全長，使能轉錄生成線性化的ORF全長序列，并能正常翻譯生成預測的多肽**aa。該載體可作為陽性對照使用。

客戶提供

1. 基因ID/物種/全長序列

2. 載體名稱

我們提供

1. T系列翻譯質粒（可選：T1-T5）；

2. 目的載體：10μg質粒+200μL甘油菌；

3. 對照載體：10μg質粒+200μL甘油菌；

4. 載體構建與驗證實驗報告：

①　載體構建步驟；

②　載體測序驗證結果原始文件；

③　細胞轉染實驗步驟；

④　qPCR實驗流程方案及產物測序；

⑤　載體構建與驗證實驗報告。

案例1：

參考文獻：

Song R, Guo P, Ren X, Zhou L, Li P, Rahman NA, Wo?czyński S, Li X, Zhang Y, Liu M, Liu J, Li X. A novel polypeptide CAPG-171aa encoded by circCAPG plays a critical role in triple-negative breast cancer. Mol Cancer. 2023 Jul 5;22(1):104. doi: 10.1186/s12943-023-01806-x. PMID: 37408008; PMCID: PMC10320902.

案例2：

參考文獻：

Tang X, Deng Z, Ding P, Qiang W, Lu Y, Gao S, Hu Y, Yang Y, Du J, Gu C. A novel protein encoded by circHNRNPU promotes multiple myeloma progression by regulating the bone marrow microenvironment and alternative splicing. J Exp Clin Cancer Res. 2022 Mar 8;41(1):85. doi: 10.1186/s13046-022-02276-7. PMID:35260179; PMCID: PMC8903708.