胰蛋白酶是一種絲氨酸蛋白酶,可特異性切割賴氨酸及精氨酸C末端肽鍵,廣泛應(yīng)用于組織與單層細(xì)胞解離;重組胰蛋白酶可以通過(guò)大腸桿菌或畢赤酵母作為表達(dá)宿主規(guī)模化生產(chǎn)。重 組胰蛋白酶相較豬、牛胰腺提取的胰蛋白酶具有更高生物安全性,尤其可替代傳統(tǒng)提取胰酶用于疫苗、干細(xì)胞、免疫細(xì)胞治療、胰島素生產(chǎn)等對(duì)動(dòng)物來(lái)源材料有嚴(yán)格限制的生物制藥產(chǎn)業(yè)。
胰蛋白酶切割胰島素氨基酸示意圖
細(xì)胞培養(yǎng)方面:組織塊消化,原代細(xì)胞獲取;貼壁細(xì)胞的傳代消化;微載體方法培養(yǎng)的細(xì)胞消化;干細(xì)胞溫和消化;免疫細(xì)胞治療等。
重組蛋白方面:重組胰島素生產(chǎn);蛋白測(cè)序、肽譜圖;蛋白組學(xué)研究等特異性酶解過(guò)程。
運(yùn)輸穩(wěn)定性:干冰保溫運(yùn)輸,運(yùn)輸過(guò)程不融化,活性穩(wěn)定。
儲(chǔ)存穩(wěn)定性:重組胰蛋白酶溶液保存在-25~-15℃,24個(gè)月穩(wěn)定。
25℃,pH 7.6,反應(yīng)體系3.2mL(1cm光路), 每分鐘酶解BAEE使253nm下的吸收值增加0.003定義為一個(gè)胰蛋白酶酶活單位(U)。
替代傳統(tǒng),優(yōu)勢(shì)之選:中國(guó)藥典推薦采用重組技術(shù)生產(chǎn)的生物材料替代動(dòng)物源性生物材料(2020年版第三部25頁(yè)),重組胰蛋白酶正在取代豬、牛胰腺提取的胰蛋白酶廣泛應(yīng)用在生產(chǎn)和研發(fā)過(guò)程中。
安全性更高:重組胰蛋白酶無(wú)外源性病毒污染,不需檢測(cè)病毒。豬、牛胰腺提取的胰蛋白酶有病毒感染的風(fēng)險(xiǎn),往往需要檢測(cè)病毒(如豬細(xì)小病毒等)含量。
批間質(zhì)量穩(wěn)定:重組胰蛋白酶工藝穩(wěn)定,批次間質(zhì)量差異小。
活力高,用量少:根據(jù)測(cè)試,重組胰蛋白酶的比活力約相當(dāng)于動(dòng)物提取胰酶5倍。
易于終止消化:重組胰蛋白酶在實(shí)驗(yàn)室中可以直接用PBS稀釋終止消化,大規(guī)模生產(chǎn)過(guò)程中可以加入大豆胰蛋白酶抑制劑終止消化,避免血清中的復(fù)雜成分可能給一些敏感細(xì)胞的生理功能帶來(lái)致命性的改變。
產(chǎn)量大,供貨有保障:重組胰蛋白酶通過(guò)重組的大腸桿菌或者畢赤酵母細(xì)胞進(jìn)行表達(dá),更易大量生產(chǎn)。