服務介紹

circRNA的翻譯模式分為IRES介導和m6A甲基化修飾介導，針對這些潛在的翻譯方式，吉賽生物提供R系列載體構建和表達驗證服務，驗證circRNA的翻譯是否由IRES介導。

IRES驗證載體示意圖

R1：Empty Vector（Luc2空載體）

Luc2報告載體是基于海腎熒光素酶（Renilla Luciferase, R-Luc）和螢火蟲熒光素酶（Firefly Luciferase, F-Luc）的cap-independent translation報告載體，R-Luc由5’ m7G帽子結構介導翻譯起始，F(xiàn)-Luc只在插入有IRES（Internal Ribosome Entry Site）活性的序列或能介導翻譯起始的序列時可以翻譯。Luc2空載體含有多克隆酶切位點，命名為Luc2-IRES- Report。

R2：EMCV IRES（插入EMCV IRES序列的Luc2報告載體陽性對照）

Luc2陽性對照載體含有EMCV IRES序列，命名為Luc2-EMCV-IRES-Report。

R3：IRES（插入預測IRES序列的Luc2報告載體）

使用Luc2-IRES-Report載體進行構建，插入預測的IRES序列全長。

R4：IRES-Del1（插入預測IRES前半部分序列的Luc2報告載體）

使用Luc2-IRES-Report載體進行構建，插入部分預測的IRES序列（已刪除后半部分）。

R5：IRES-Del2 (插入預測IRES后半部分序列的Luc2報告載體)

使用Luc2-IRES-Report載體進行構建，插入部分預測的IRES序列（已刪除前半部分）。

客戶提供

circRNA名稱（ID）、物種&已預測的IRES序列信息及序列刪減要求信息。

我們提供

1. R系列翻譯Luc2-IRES-Report載體質粒（可選：R1-R5）；

2. 目的載體：10μg質粒+200μL甘油菌；

3. 對照載體：10μg質粒+200μL甘油菌；

4. Luc2-IRES-Report載體構建與驗證實驗報告：

①　載體構建步驟；

②　載體測序驗證結果原始文件；

③　細胞轉染實驗步驟；

④　熒光素酶活性檢測實驗報告。