吉賽生物提供circRNA qRT-PCR試劑盒，產品包含逆轉錄和定量PCR檢測配套試劑，用于circRNA表達水平及差異的檢測分析，同樣適用于mRNA以及lncRNA。

本產品的TransScript RT Enzyme (M-MLV) 是在M-MLV (RNase H-) Reverse Transcriptase基礎上通過體外分子進化技術獲得的全新逆轉錄酶。大幅提高了熱穩定性，在50℃的半衰期超過240分鐘，并可在55℃長時間反應而保持穩定，非常適合具有復雜二級結構的RNA模板的逆轉錄。定量PCR檢測的試劑是使用SYBR Green I嵌合熒光法進行qPCR的專用試劑。circRNA和lncRNA 的表達水平相對較低，需要摸索多個條件才能優化擴增體系，本產品配合針對qPCR優化的最適Buffer，可以有效抑制非特異擴增，顯著提高擴增效率，適用于進行高靈敏度的qPCR反應。

產品特點

1、 試劑盒包含了Oligo dT和隨機引物，適用范圍廣；

2、 針對低拷貝RNA優化的體系擴增效率高，特異性強，靈敏度高；

3、 全方位配套的引物產品及技術服務：吉賽生物依托多年技術經驗，已驗證circRNA引物1萬多對，篩選出特異性引物達2000多對，并建立了“circRNA引物庫”，可向研究人員提供引物序列信息，同時可提供?circRNA qPCR引物設計、circRNA qPCR檢測服務，有效保障實驗快速成功。

[1] IF13.493 The circFASN/miR-33a pathway participates in tacrolimus-induced dysregulation of hepatic triglyceride homeostasis. Signal Transduction and Targeted Therapy

[2] IF13.493 The circFASN/miR-33a pathway participates in tacrolimus-induced dysregulation of hepatic triglyceride homeostasis. Signal Transduction and Targeted Therapy

[3] IF9.229 In Vitro Study on the Piezodynamic Therapy with a BaTiO3-Coating Titanium Scaffold under Low-Intensity Pulsed Ultrasound Stimulation. ACS Applied Materials & Interfaces

[4] IF9.229 In Vitro Study on the Piezodynamic Therapy with a BaTiO3-Coating Titanium Scaffold under Low-Intensity Pulsed Ultrasound Stimulation. ACS Applied Materials & Interfaces

[5] IF8.886 Effects of long-term culture on the biological characteristics and RNA profiles of human bone-marrow-derived mesenchymal stem cells. Molecular Therapy-Nucleic Acids

A常見問題

1、如何設置溶解曲線的溫度？

我們做測試的時候用的是ABI

7500的儀器，溶解曲線的設置都是儀器默認的，所以溶解曲線用儀器默認的即可。

2、GS0202-2試劑盒只能用于circRNA的逆轉錄嗎？

不是的，也可用于普通的mRNA和LncRNA的逆轉錄。

3、Reverse Transcription Primer中是否均包含Oligo dT和隨機引物，還是只包含其中一種引物？

包含了Oligo dT和隨機引物。

4、我們的熒光定量PCR試劑盒有哪些優點？

擴增效率高和特異性好。

5、在配置qPCR的反應液時，反應體系為20ul，模板量應加多少合適？

建議用1ug的RNA進行逆轉錄，逆轉錄后的產物稀釋5-10倍，取2ul cDNA進行qPCR反應?？筛鶕蛻舻膶嶒炓筮M行適當的調整。

6、GS0202-2試劑盒可用于cfRNA的逆轉錄嗎？

可以的。

7、GS0202試劑盒的引物設計合成需要我們提供哪些信息？

需要提供種屬信息、相關的circRNA ID號和序列。

8、里面master mix中是否可以直接跑電泳，還需要上樣緩沖液么？

需要加。

9、CT 值出現太晚或檢測為陰性

a. 擴增效率極低：優化反應條件，嘗試三步法擴增程序。

b. 模板濃度太低：減少稀釋度重復試驗，一般未知濃度的樣品先從最高濃度做起。

c. 模板降解：重新制備模板，重復試驗。

10、反應結束無擴增曲線出現

a. circRNA 在細胞株或組織中不表達：更換模板。

b. 反應循環數不夠：一般設置循環數為 40，但需要注意的是過多的循環數會增加過多的背景信號，降低數值可信度。

c. 確認程序中是否設置了信號采集步驟：兩步法擴增程序一般將信號采集設置在退火延伸階段；三步法擴增程序應當將信號采集設置在 72℃延伸階段。

d. 模板濃度太低：減少稀釋度重復試驗，一般未知濃度的樣品先從最高濃度做起。

e. 模板降解：重新制備模板，重復試驗。

11、陰性對照也出現明顯擴增

反應體系或水被污染：更換新的 Mix 或者水重復試驗。反應體系在超凈工作臺內配置，減少氣溶膠污染。

12、實驗重復性差

a. 加樣體積失準：使用性能較好的移液槍，擴大反應體積，將模板做高倍稀釋，以大體積加入反應體系中。

b. 定量 PCR 儀不同位置溫度控制不一致：定期校準儀器。

c. 模板濃度太低：模板濃度越稀，重復性越差，較少模板稀釋度或者提高加樣體積。

13、本產品是否可以 4℃儲存

a. 不可以。4℃儲存將會導致產品活性下降。

b. 該產品-20℃儲存可以長期保持活性，推薦-20℃儲存。

c. 因反復凍融也可能導致產品活性下降，因此當每次用量較小時，推薦小體積分裝后-20℃儲存。

B注意事項

1、本產品盡量避免反復凍融，以免酶活下降。如每次使用量較少，推薦小份分裝使用。

2、使用前請上下顛倒混勻，請勿渦旋以免產生過多氣泡引起反應體系失準，進而影響定量結果?；靹蚝筝p微離心后即可使用。如操作不慎產生氣泡，請再次離心后使用。

3、由于產品中的 2×qPCR SYBR Green Master Mix 含有熒光染料 SYBR Green I， 因此無論保存 Mix還是配置反應體系時都應該盡量避免強光照射。